Tejido fijado en formol e incluido en parafina (FFPE)

• Espesor del tejido: Las muestras de tejido gruesas pueden impedir que el formol penetre completamente, lo que provocaría una fijación y degradación desiguales. Las muestras de tejido deben tener un grosor de unos 4-5 mm para garantizar una conservación adecuada.
• Formalina Volumen: La cantidad de formol debe ser al menos diez veces el volumen del tejido para garantizar una difusión eficaz.

• Temperatura: La incrustación de tejidos a altas temperaturas daña las proteínas y los ácidos nucleicos. Lo ideal es incrustar a 55-60 °C.
• Pureza de la parafina: Las impurezas de la parafina pueden interferir en la investigación molecular, por lo que es importante utilizar parafina de gran pureza.
• Calidad de la integración: Una incrustación incompleta o deficiente puede dejar burbujas de aire o huecos, que pueden degradar la calidad del tejido y afectar a la posterior sección y tinción.

• Isquemia: La reducción del riego sanguíneo antes de la escisión provoca cambios bioquímicos que degradan las moléculas. Minimizar el tiempo desde la cirugía hasta la fijación ayuda a evitar este problema.
• Autolisis: Los retrasos en el procesamiento pueden provocar una rápida descomposición del tejido. La manipulación rápida y la transferencia al fijador son esenciales.

• Duración del almacenamiento: Con el tiempo, los tejidos FFPE experimentan la degradación del ADN y el ARN. Aunque las proteínas son más estables, también pueden degradarse con el tiempo.
• Temperatura y humedad: Los bloques FFPE deben almacenarse a temperaturas estables y en condiciones secas. Una humedad elevada puede provocar la degradación de la parafina o la aparición de moho, y las fluctuaciones de temperatura pueden agrietar los bloques de parafina, dañando aún más el tejido.
• Oxidación: Con el tiempo, el tejido FFPE puede estar expuesto a factores ambientales como el oxígeno, que puede causar daños oxidativos, degradando aún más los ácidos nucleicos y las proteínas.

• Composición de los tejidos: Los distintos tipos de tejidos responden de forma diferente a la fijación con formol. Por ejemplo, los tejidos grasos (por ejemplo, el tejido adiposo) pueden no fijarse tan bien como otros tipos debido a la escasa penetración del formol en las zonas ricas en lípidos. Del mismo modo, los tejidos muy vascularizados pueden ser más susceptibles a la autolisis.
• Estado de la enfermedad: Los tejidos enfermos o necróticos pueden ser más difíciles de preservar debido a la degradación existente o a una integridad estructural deficiente, lo que puede agravar los problemas de la fijación con formol.

• Microtomía y seccionamiento: Un seccionamiento inadecuado (por ejemplo, el uso de cuchillas sin filo o un corte demasiado grueso) puede dañar el tejido, dificultando su análisis tanto en histopatología como en ensayos moleculares.
• Contaminación cruzada: La manipulación adecuada durante el seccionamiento es crucial para evitar la contaminación, especialmente en laboratorios con mucho trabajo.

• Calidad de la desparafinización: Cuando se rehidratan tejidos FFPE para aplicaciones posteriores (por ejemplo, inmunohistoquímica o análisis molecular), una desparafinación incompleta puede dejar parafina residual que puede interferir con la tinción y los ensayos moleculares.
• Protocolos de tinción: La calidad de la tinción histológica o inmunohistoquímica puede verse afectada por la calidad de la fijación. Una fijación deficiente puede dar lugar a una tinción débil o a la pérdida de detalles morfológicos, lo que repercute en el uso del tejido para el diagnóstico y la investigación.

• Calidad de la extracción: Los protocolos utilizados para extraer ADN, ARN o proteínas de tejidos FFPE deben optimizarse para hacer frente a las dificultades que plantean la reticulación con formol y la inclusión en parafina. Si no se optimizan los protocolos de extracción, el rendimiento y la calidad de las biomoléculas pueden ser bajos, lo que limita la utilidad del tejido en aplicaciones posteriores.
• Fragmentación del ácido nucleico: La fragmentación del ADN y el ARN inducida por FFPE puede variar en función de las condiciones de fijación. Los ácidos nucleicos más cortos y fragmentados pueden suponer un reto para técnicas moleculares como la PCR o la secuenciación de nueva generación.

• Modificaciones químicas: La fijación con formalina puede inducir modificaciones químicas en el ADN, como la formación de aductos de metilol o cambios oxidativos, que pueden interferir en los resultados de la amplificación por PCR o la secuenciación.
• Reticulación de proteínas: La reticulación con formaldehído puede enmascarar epítopos proteicos, lo que complica la tinción inmunohistoquímica. La recuperación de epítopos inducida por calor (HIER) suele ser necesaria, pero puede no restaurar completamente la antigenicidad de algunas proteínas.

Para garantizar tejidos FFPE de alta calidad con fines de investigación y diagnóstico, es importante controlar cuidadosamente los factores preanalíticos (como el tiempo y la duración de la fijación), optimizar los protocolos de manipulación e incrustación y almacenar las muestras en condiciones adecuadas. Además, se necesitan métodos validados de extracción y análisis para superar los retos que plantean la reticulación y la degradación inducidas por la fijación.